English
!

Архив публикаций

Тезисы

XXV-ая конференция

Методические приемы усиления ответов экспериментальных биообъектов in vitro при воздействии биологически активных веществ

Алексеева О.М., Кременцова А.В., Голощапов А.Н.

Институт Биохимической физики РАН им. Н.М. Эмануэля. Россия, 119334, Москва, ул. Косыгина д. 4, (495)939-74-09, факс (499)137-41-01, olgavek@yandex.ru

1  стр. (принято к публикации)

Известно, что физиологически адекватные ответы биологических структур животного происхождения при воздействии биологически активных веществ (БАВ) во многих случаях недоступны для регистрации в связи с незначительным изменением параметров экспериментального объекта. Поэтому при работе in vitro с модельными биообъектами были подобраны условия для усиления ответа экспериментального биообъекта для получения регистрируемого результата. В качестве БАВ применяли синтетическое вещество мелафен (меламин бисфосфиновая кислота) - регулятор роста растений, и природный метилксантин кофеин. Как модельные объекты использовали липидные и белок-липидные мембраны, органеллы и клетки. Изучение влияния мелафена на структурные свойства биомембран было проведено с помощью подходов, направленных на усиление чувствительности экспериментальных биообъектов к воздействию. Влияние мелафена на структуру мембраны тестировали с помощью дифференциальной сканирующей микрокалориметрии (ДСК). Липид-липидные взаимодействия под влиянием мелафена регистрировали при плавлении мультиламмелярных липосом из димиристоилфосфатидилхолина (ДМФХ). Варьирование скорости подачи тепла к образцам позволило усилить и выявить эффекты мелафена на перестройку микродоменной организации липидов в бислое. Действие мелафена на белок-белковые взаимодействия регистрировали на свежевыделенных и состаренных мембранах теней эритроцитов. При старении взаимосвязи компонентов цитоскелета ослабляются, и проявление эффектов действующего вещества усиливается. Для мелафена не выявлено деструктурирующего действия в белковых микродоменах теней. Влияние мелафена на целых клетках - эритроцитах тестировали, регистрируя спонтанный гемолиз и гемолиз при экстремальных условиях – в гипо- и гипертонических средах спектральным методом. Другой подход позволил зарегистрировать влияние кофеина, на активность Са2+-насоса - АТФ-азы, и Са2+-канала в органеллах - фрагментах саркоплазматического ретикулума (СР). Функциональные свойства органелл тестировали потенциометрически при гидролизе АТФ. Методический прием заключался в увеличении кальций аккумулирующей способности СР. Краткосрочное старение органелл повышает проницаемость бислоя для анионов оксалата. Оксалат проникает в люмен СР и связывает Са2+. Постоянно снижая концентрацию свободного Са2+ внутри СР, оксалат повышает способность поглощать Са2+, активируя АТФ-азу значительно выше физиологических значений. Результаты указывают на то, что структурные и функциональные свойства биообъектов меняются in vitro при исследовании действия БАВ в специальных методических условиях для получения регистрируемых ответов.



© 2004 Дизайн Лицея Информационных технологий №1533