|
Архив публикацийТезисыXVII-ая конференцияОценка повреждений тотипотентных клеток холоднокровных in vivo и in vitro при замораживанииИнститут биофизики клетки РАН, Россия, г.Пущино, Институтская,3, emelnikova@icb.psn.ru 1 стр. (принято к публикации)Замораживание тотипотентных клеток и ранних зародышей холоднокровных для решения задач криоконсервации требует оценки сохранения жизнеспособности этих клеток на различных этапах данного процесса. Возможность получить оценку сохранения целостности мембраны клетки и оболочки зародыша, активности их эстераз и состояния хроматина клеток зародышей in vivo и in vitro дает использование флуоресцентных красителей - АНС, ФДА, ДАПИ, ЭБ и Hoechst.
В данной работе методом последовательного флуорохромирования АНС(313 Д) и ФДА(413Д) было исследовано состояние зародышевых клеток травяной лягушки Rana temporaria in vitro. Показано, что этот метод дает возможность проследить динамику состояния барьерной функции клеток и степень сохранения эстеразной активности их цитоплазмы при замораживании-оттаивании. Далее мы исследовали состояние тех же зародышевых клеток in vivo в процессе повышения проницаемости зародышевых оболочек ультразвуком. Результаты показали, что при щадящем действии ультразвука дегидрогеназная активность тотипотентных клеток в зародыше сохраняется.
Проведенные исследования показывают, что метод двойного флуорохромирования достаточно эффективен для оценки состояния тотипотентных клеток и выбора условий их замораживания-оттаивания, а полученные оценки повреждений могут быть полезными для моделирования процессов, протекающих в клетке при замораживании. |